
Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale, reproduit depuis ALURES
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-434802)
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Les maladies cardiovasculaires sont la première cause de mortalité dans le monde et sont en croissante progression dans les pays à revenus faibles ou modérés. La principale cause sous-jacente de ces maladies est l’athérosclérose, une pathologie complexe et multifactorielle qui touche principalement les artères de gros et moyens calibres. Cette pathologie consiste en un dépôt de lipide dans la paroi des artères. Elle se développe dès l’enfance mais la progression des lésions augmente avec l’âge et varie selon le mode de vie (alimentation, exrcice physique, stress, tabagisme…) et nos facteurs de risque (diabète, hypertension, obésité). La première étape du développement de la plaque d’athérome est la perte d’intégrité (ou dysfonction) de l’endothélium qui est une barriere entre le sang et paroi artérielle. Cette perte d’intégrité de la barrière endothéliale favorise l’infiltration des lipoprotéines de basses densité (LDL) circulantes dans l’espace sous-endothélial induisant des réponses cellulaires de type inflammatoires et fibroprolifératives à l’origine des lésions athéromateuses. Au cours du temps, cette plaque d’athérome vient obstruer la lumière de l’artère et sa rupture sera responsable des conséquences dramatiques de cette pathologie comme l’infarctus du myocarde ou l’accident vasculaire cérébral. L’objectif de ce projet est donc de mieux comprendre les mécanismes moléculaires et cellulaires impliqués dès l’initiation de cette pathologie jusqu’aux stades tardifs pour évaluer la vulnérabilité de la plaque et proposer de nouvelles cibles thérapeutiques dans ce contexte physiopathologique. Plusieurs travaux ont déjà identifié que des protéines de la famille des phosphoinositides 3-kinase (PI3K) pourraient être des cibles thérapeutiques intéressantes dans ce contexte et nous souhaitons valider leur implication au cours de ce travail. Le projet se déroule dans deux Établissements Utilisateurs.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Ce projet permettrait de mettre en évidence de nouvelles cibles thérapeutiques qui pourraient être utilisées pour prévenir ou ralentir le développement de l’athérosclérose et diminuer ses conséquences dramatiques sur les maladies cardiovasculaires.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Tout ou partie des animaux enrolés dans ce protocole seront soumis à: 1/un régime enrichi en gras pendant 4 semaines ou 8 semaines ou 20 semaines 2/des injections tous les 2 jours 3/un prélèvement sanguin une seule fois le jour de la mise à mort sur animal vigile (durée: 1 min) 4/une perfusion intracardiaque une seule fois le jour de la mise à mort (durée: 10min). Le projet se déroule dans deux établissements utilisateurs avec un transport des animaux encadré par une procédure de transport déclarée (cheminement et conditions de transport validés par signature d’une charte de transport). Les interventions 1, 2 sont réalisés dans l’EU1/2 et les interventions 3, 4 sont réalisés dans l’EU2/2.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
La piqure d’une aiguille pour injecter des inhibiteur des cibles pharmacologiques étudiées entraine une douleur légère de courte durée . Un prélèvement sanguin sur animal vigile placé en décubitus latéral entraine une douleur légère de courte durée.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
A l’issu de chacune des procédures, les animaux seront mis à mort pour analyser par immunofluorescence l’endothélium (pour les étapes initiatrices du développement de l’athérosclérose) ou les dépôts lipidiques signant la présence de plaque d’athérome (pour les stades précoces à plus avancés).
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Notre équipe développe des modèles in vitro en 2D et 3D des vaisseaux pour éviter à son maximum la nécessité d’avoir recours à des modèles animaux. Néanmoins, l’athérosclérose est une pathologie multifactorielle qui fait intervenir les cellules de paroi vasculaire mais également les cellules inflammatoires et plusieurs facteurs circulants. Il est encore prématuré de pouvoir complètement modéliser cette pathologie complexe in vitro. Les animaux vivants resprésentent le seul modèle intégré et restent indispensables pour obtenir des résultats fiables sur cette pathologie.
2. Réduction
Le nombre d’animaux utilisé est réduit à son maximum en respectant les contraintes de publication, sans compromettre les objectifs de l’étude et pour permettre de bonnes analyses statistiques. Nous utiliserons des tests statistiques appropriés en fonction du design de chaque expérience. Nos études antérieures ont montré que des groupes de 20 animaux sont requis pour obtenir une répartition normale des mesures et des résultats robustes dans notre contexte d’étude. Le choix du groupe témoin sera optimisé pour permettre sa comparaison avec plusieurs groupes expérimentaux et ainsi diminuer l’utilisation inutile d’animaux. Enfin, sur chaque animal le coeur et l’aorte seront simultanément prélevés et les autres tissus de l’animal mis à mort seront proposés aux autres membres de l’équipe et de notre institut de recherche pour permettre d’optimiser au maximum l’utilisation de chaque animal.
3. Raffinement
Les animaux seront transportés entre les deux établissements suivant une procédure de transport déclarée lors de l’agrément de l’établissement (cheminement et conditions de transport validés par signature d’une charte de transport). Les animaux sont hébergés en cages ventilées, selon les normes de la directive 2010/63/EU, avec un enrichissement dans chaque cage (igloo, batônnets de bois, coton, sizzle nest). Des méthodes alternatives à la préhension par la queue sont utilisées, les procédures de mise à mort sont réalisées sous anesthésie et analgésie. Quelle que soit la procédure utilisée, une observation des animaux en expérimentation est réalisée quotidiennement par du personnel compétent ayant un livret de compétence à jour et formé aux approches de chirurgie. L’état général de l’animal est évalué : prise de nourriture, toilette et mouvements habituels sont considérés comme des signes de bonne santé. La douleur est évaluée par les signes de prostration, de perte d’appétit ou de poids et de mouvements pénibles. Toute altération du bien-être (prostration, perte de poids, piloerection, blessures) des animaux sera évalué en concertation avec la structure chargée du bien être des animaux et le vétérinaire référent pour déterminer les soins ou l’action à appliquer pour Réduire le stress, l’angoisse ou la souffrance animale.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
La souris est le seul modèle expérimental pour lequel il existe des animaux génétiquement modifiés: 1/ pour les différentes cibles étudiées dans ce projet et 2/permettant de récapituler de façon induite par un régime ou spontanée le développement de l’athérosclérose. De plus cette espèce de rongeur a des propriétés zootechniques (petite taille, un cycle de reproduction court permettant rapidement d’obtenir des générations successives pour les études à long terme) autorisant une mise en œuvre des protocoles expérimentaux de recherche facilitée et maîtrisée par notre équipe de recherche. Cette espèce présente également des paramètres physiologiques proches de l’Homme, la plaçant comme un organisme-modèle de choix pour l’étude des pathologies cardiovasculaires. Pour évaluer l’impact de l’invalidation de nos différentes cibles moléculaires au cours du développement de l’athérosclérose, les animaux utilisés seront agés de 14 semaines (étape initiatrice de l’athérosclérose), 18 semaines (stade précoce du développement de cette pathologie artérielle) ou 30 semaines (stade tardif du développement de cette pathologie artérielle).